البراء
23-04-2008, 11:09 PM
السلام عليكم و رحمة الله و بركاته
استنبات البكتيريا
الأدوات الــــــلازمة :- طبق بتري يحتوي على بيئة غذائية مناسبة.
- مصدر العينة المراد زراعتها قد تكون قطعا من الفاكهة المنعفنة أو عينة من بين الأسنان أو عينة بول.
- لهب بنسن.
- أداة الزرع "Loop" وهي سلك مصنوع عادة من خليط من النيكل والكروم, ومثبت على مقبض خشبي ومعقوف من الأمام بشكل عروة أو دائرة صغيرة.
- حاضنة.
"
إرشادات قبل الزراعة.
إذا كانت العينة مأخوذة من مصدر صلب أو شبه صلب, كالعينة المأخوذة من فاكهة متعفنة فيتم إذابتها في قطرات من الماء المقطر فوق شريحة معقمة.
أما العينة المأخوذة من بين الأسنان فنؤخذ بواسطة منكاش اسنان عريض الطرف بعد تعقيمه وذلك بوضعه في الكحول ثم تذاب العينة في قطرات من الماء المقطر فوق شريحة معقمة."
طريقة الزراعة:
أ- عقم أداة الزرع "Loop" بوضعها فوق الجزء الأزرق من لهب بنسن مباشرة حتى تحمر, ثم اتركها (20-30) ثانية تقريبا لتبرد مع ابقاء اللهب مشتعلا بالقرب من منطقة الزراعة.
ب- خذ جزءًا من العينة المراد زراعتها, وذلك بوضع ال "Loop" منبطح على سطح السائل المحتوي على العينة.
ج- ارفع غطاء طبق بتري إلى مسافة صغيرة بالقرب من اللهب المشتعل, ثم مرر ال "Loop" على سطح بيئة الزراعة.
د- أعد إغلاق طبق بتري بغطائه الخاص, وضعه في الحاضنة في درجة حرارة (36-40درجة سيليزية) مدة 24 ساعة.
هـ- عقم ال"Loop" ثانية بوضعه على لهب بنسن حتى تحمر لقتل أية جراثيم عالقة بها.
و- أخرج طبق بتري من الحاضنة,ولاحظ وجود بقع مختلفة اللون داخله حيث تمثل كل بقعة مجموعة تضم عددا كبيرا من البكتيريا.
إحـــــــ إحذر إحذر ــــــــــــــــذر:
لا تحاول فتح طبق بتري, أو تقريبه من أنفك وهو مفتوح, بل أنظر إليه وهو مغلق.
دراسة العينة مجهريا.
يتم فحص خواص الشكل الظاهري للبكتيريا وصفاته بالمجهر المركب وذلك باستخدام قوة تكبير كافية لإعطاء صورة واضحة لكائنات متناهية في الصغر قد يبلغ طولها 0.15 من الميكرون.
ومن الممكن أن تفحص تحت المجهر خلايا بكتيرية حية عير مصبوغة, ت}خذ مباشرة من العينة المراد دراستها أو من المزرعة التي حضرت سابقا ( أي في الدرس السابق) أو خلايا بكتيرية ميته مصبوغة.
فحص الخلايا غير المصبوغة
تستخدم هذه الطريقة لفحص الخلايا الحية وتحديد شكلها وتركيبها الداخلي وحركتها وترتيبها وملاحظة عمليات التكاثر فيها.
" طريقة العمل:[/
1- استخدم هذه الطريقة في الشريحة الزجاجية ذات الفجوة ( بس ما أعتقد أنها موجودة معنا بالمختبر).
2- أذب العينة المراد دراستها التي أخذت من المزرعة المحضرة أو من بين الأسنان أو من قطعة متعفنة من الفاكهة , في قطرات من الماء المقطر وذلك باستخاد ال" loop"أو منكاش الأسنان داخل أنبوب زجاجي.
3- باستخدام القطارة ضع نقطة صغيرة من السائل المحتوي على العينة على غطاء الشريحة المستخدمة,ثم ألصقها بإحكام فوق الجزء المجوف من الشريحة , بحيث تتدلى النقطة من الغطاء داخل التجويف المستدير في وسط الشريحة.
4- يمكنك استخدام الشريحة العادية أيضا في دراسة الخلايا الحية, وذلك بأن تضع نقطة من السائل المحتوي على العينة على الشريحة مباشرة , ثم غطها بغطاء الشريحة ذاتها منعا من تبخر السائل.
5- وينصح باستخام المجهر ذي الحقل المظلم أو المجهر المجسم لدراسة الخلايا البكتيرية الحية التي يصعب دراستها تحت المجهر المركب العادي لكونها عديمة اللون, ولأن مشاهدة الأسواط عليها أمر مستحيل.
فحص الخلايا المصبوغة ... وكيفية الصباغ
تستخدم هذه الطرية لدراسة الشكل الظاهري للخلايا البكتيرية من حيث : ترتيب الخلايا, ومشاهدة الحبيبات والحويصلات والأسواط, كما تستخد أيضا لتحديد سلوك الخلايا تجاه استجابتها للأصباغ التمييزية.
" طريقة الصبغ البسيطة:
1- باستخدام القطارة , ضع قطرة أو قطرتين من السائل المحتوي على العينة المراد دراستها على شريحة زجاجية معقمة, وباستخدام عود خشبي أو منكاش أسنان معقم أنشر قطرة السائل على سطح الشريحة
2- اترك الشريحة فترة من الوقت بالقرب من لهب بنسن حتى تجف, ثم مررها وبسرعة خلال اللب عدة مرات حتى يتم تثبيت البكتريا عليها.
3- ضع الشريحةفي حوض الصباغة ثم أضف إليها باستخدام القطارة بضع قطرات من صبغة أزرق الميثيلين أو الفوكسين القاعدي أو البنفسج البلوري.
4- اترك الشريحة فترة من الوقت (1-3) دقائق, ثم اغسلها بالماء المقطر باستخدام عبوة الغسيل البلاستيكية أو القطارة.
5- جفف الشريحة بتركها فترة من الوقت بالقرب من لهب بنسن أو باستخدام ورق النشاف.
6- ضع قطرة ماء مقطر فوق الفلم المصبوغ, ثم غط الشريحة بغطائها, ولحفظ العينة ألصق أطراف الغطاء بالشريحة بالفازلين أو باستخدام كندا بلسم.
7- افحص الشريحة بالمجهر وذلك باستخدام العدسة الزيتية بعد أن تضع قطرة زيت السدر ( سيدرا) فوق الشريحة, ومن ثم تغطس العدسة الزيتية فيها. ولتوضيح الصورة استخدم الضابط الصغير لتجنب كسر الشريحة.
8- استخدم ورق تنظيفغ العدسات في إزالة بقايا الزيت عن العدسة الزيتية والشريحة المحضرة بعد الإنتهاء من عملية الفحص.
9- ضع بطاقة صغيرة على طرف الشريحة تبين فيها اسم عينة البكتيريا, وتاريخ تحضيرها , ثم احفظها في صندوق حفظ الشرائح في المختبر.
" مـنـقـول "
استنبات البكتيريا
الأدوات الــــــلازمة :- طبق بتري يحتوي على بيئة غذائية مناسبة.
- مصدر العينة المراد زراعتها قد تكون قطعا من الفاكهة المنعفنة أو عينة من بين الأسنان أو عينة بول.
- لهب بنسن.
- أداة الزرع "Loop" وهي سلك مصنوع عادة من خليط من النيكل والكروم, ومثبت على مقبض خشبي ومعقوف من الأمام بشكل عروة أو دائرة صغيرة.
- حاضنة.
"
إرشادات قبل الزراعة.
إذا كانت العينة مأخوذة من مصدر صلب أو شبه صلب, كالعينة المأخوذة من فاكهة متعفنة فيتم إذابتها في قطرات من الماء المقطر فوق شريحة معقمة.
أما العينة المأخوذة من بين الأسنان فنؤخذ بواسطة منكاش اسنان عريض الطرف بعد تعقيمه وذلك بوضعه في الكحول ثم تذاب العينة في قطرات من الماء المقطر فوق شريحة معقمة."
طريقة الزراعة:
أ- عقم أداة الزرع "Loop" بوضعها فوق الجزء الأزرق من لهب بنسن مباشرة حتى تحمر, ثم اتركها (20-30) ثانية تقريبا لتبرد مع ابقاء اللهب مشتعلا بالقرب من منطقة الزراعة.
ب- خذ جزءًا من العينة المراد زراعتها, وذلك بوضع ال "Loop" منبطح على سطح السائل المحتوي على العينة.
ج- ارفع غطاء طبق بتري إلى مسافة صغيرة بالقرب من اللهب المشتعل, ثم مرر ال "Loop" على سطح بيئة الزراعة.
د- أعد إغلاق طبق بتري بغطائه الخاص, وضعه في الحاضنة في درجة حرارة (36-40درجة سيليزية) مدة 24 ساعة.
هـ- عقم ال"Loop" ثانية بوضعه على لهب بنسن حتى تحمر لقتل أية جراثيم عالقة بها.
و- أخرج طبق بتري من الحاضنة,ولاحظ وجود بقع مختلفة اللون داخله حيث تمثل كل بقعة مجموعة تضم عددا كبيرا من البكتيريا.
إحـــــــ إحذر إحذر ــــــــــــــــذر:
لا تحاول فتح طبق بتري, أو تقريبه من أنفك وهو مفتوح, بل أنظر إليه وهو مغلق.
دراسة العينة مجهريا.
يتم فحص خواص الشكل الظاهري للبكتيريا وصفاته بالمجهر المركب وذلك باستخدام قوة تكبير كافية لإعطاء صورة واضحة لكائنات متناهية في الصغر قد يبلغ طولها 0.15 من الميكرون.
ومن الممكن أن تفحص تحت المجهر خلايا بكتيرية حية عير مصبوغة, ت}خذ مباشرة من العينة المراد دراستها أو من المزرعة التي حضرت سابقا ( أي في الدرس السابق) أو خلايا بكتيرية ميته مصبوغة.
فحص الخلايا غير المصبوغة
تستخدم هذه الطريقة لفحص الخلايا الحية وتحديد شكلها وتركيبها الداخلي وحركتها وترتيبها وملاحظة عمليات التكاثر فيها.
" طريقة العمل:[/
1- استخدم هذه الطريقة في الشريحة الزجاجية ذات الفجوة ( بس ما أعتقد أنها موجودة معنا بالمختبر).
2- أذب العينة المراد دراستها التي أخذت من المزرعة المحضرة أو من بين الأسنان أو من قطعة متعفنة من الفاكهة , في قطرات من الماء المقطر وذلك باستخاد ال" loop"أو منكاش الأسنان داخل أنبوب زجاجي.
3- باستخدام القطارة ضع نقطة صغيرة من السائل المحتوي على العينة على غطاء الشريحة المستخدمة,ثم ألصقها بإحكام فوق الجزء المجوف من الشريحة , بحيث تتدلى النقطة من الغطاء داخل التجويف المستدير في وسط الشريحة.
4- يمكنك استخدام الشريحة العادية أيضا في دراسة الخلايا الحية, وذلك بأن تضع نقطة من السائل المحتوي على العينة على الشريحة مباشرة , ثم غطها بغطاء الشريحة ذاتها منعا من تبخر السائل.
5- وينصح باستخام المجهر ذي الحقل المظلم أو المجهر المجسم لدراسة الخلايا البكتيرية الحية التي يصعب دراستها تحت المجهر المركب العادي لكونها عديمة اللون, ولأن مشاهدة الأسواط عليها أمر مستحيل.
فحص الخلايا المصبوغة ... وكيفية الصباغ
تستخدم هذه الطرية لدراسة الشكل الظاهري للخلايا البكتيرية من حيث : ترتيب الخلايا, ومشاهدة الحبيبات والحويصلات والأسواط, كما تستخد أيضا لتحديد سلوك الخلايا تجاه استجابتها للأصباغ التمييزية.
" طريقة الصبغ البسيطة:
1- باستخدام القطارة , ضع قطرة أو قطرتين من السائل المحتوي على العينة المراد دراستها على شريحة زجاجية معقمة, وباستخدام عود خشبي أو منكاش أسنان معقم أنشر قطرة السائل على سطح الشريحة
2- اترك الشريحة فترة من الوقت بالقرب من لهب بنسن حتى تجف, ثم مررها وبسرعة خلال اللب عدة مرات حتى يتم تثبيت البكتريا عليها.
3- ضع الشريحةفي حوض الصباغة ثم أضف إليها باستخدام القطارة بضع قطرات من صبغة أزرق الميثيلين أو الفوكسين القاعدي أو البنفسج البلوري.
4- اترك الشريحة فترة من الوقت (1-3) دقائق, ثم اغسلها بالماء المقطر باستخدام عبوة الغسيل البلاستيكية أو القطارة.
5- جفف الشريحة بتركها فترة من الوقت بالقرب من لهب بنسن أو باستخدام ورق النشاف.
6- ضع قطرة ماء مقطر فوق الفلم المصبوغ, ثم غط الشريحة بغطائها, ولحفظ العينة ألصق أطراف الغطاء بالشريحة بالفازلين أو باستخدام كندا بلسم.
7- افحص الشريحة بالمجهر وذلك باستخدام العدسة الزيتية بعد أن تضع قطرة زيت السدر ( سيدرا) فوق الشريحة, ومن ثم تغطس العدسة الزيتية فيها. ولتوضيح الصورة استخدم الضابط الصغير لتجنب كسر الشريحة.
8- استخدم ورق تنظيفغ العدسات في إزالة بقايا الزيت عن العدسة الزيتية والشريحة المحضرة بعد الإنتهاء من عملية الفحص.
9- ضع بطاقة صغيرة على طرف الشريحة تبين فيها اسم عينة البكتيريا, وتاريخ تحضيرها , ثم احفظها في صندوق حفظ الشرائح في المختبر.
" مـنـقـول "